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酵母细胞的典型载体



录入时间:2024-3-21 16:12:03 来源:青岛杏鑫娱乐

(1)YIP载体

  YIP载体由大肠杆菌质粒和酵母的DNA片段组成,可与受体或宿主的染色体DNA同源重组,整合进入宿主染色体中,故只能以单拷贝方式存在,常用于遗传分析。

(2)YRP载体

  YRP载体也由大肠杆菌质粒和酵母的DNA片段组成,但酵母DNA片段不仅提供抗性基因筛选标志,而且带有酵母的自主复制顺序(ARS)。由于大肠杆菌质粒本身也有一个复制点,所以这类质粒既可在大肠杆菌、又可在酵母中复制和表达,属于大肠杆菌-酵母穿梭载体。

(3)YAC载体

  YAC载体是酵母人工染色体(yeast artificial chromosone)的缩写,属于能在酵母细胞中克隆大片段外源DNA的克隆体系,是由酵母染色体中分离出来的DNA复制起始序列、着丝点、端粒以及酵母选择性标记组成的能自我复制的线性克隆载体。

  实际上YAC载体以质粒的形式出现,该质粒的长度约11.4kb,带有人工染色体所需的一切元件。如图11.4.2所示,当用它进行克隆时,先用BamHI和SmaI对它进行酶解,回收两个臂,然后平末端的外源大片段DNA就可以同两个臂连接,形成真正意义上的人工染色体。

  结果表明,每个YAC可以装进100万碱基以上的大片段DNA,比柯斯质粒的装载能力还要大得多。YAC既可以保证基因结构的完整性,又可以大大减少建立基因文库所需的克隆数目,从而使文库的操作难度减少。这种能组装大片段DNA的质粒对生物基因组计划的实施具有重要的意义。

 

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