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    复方羊角片微生物限度检查法方法学验证试验研究



    录入时间:2011-3-10 9:15:28 来源:医学论文网

     

    【摘要】  方针:建树复方羊角片微生物限度搜检体例。体例:接纳低速离心沉淀集菌与造就基稀释联用法、造就基稀释法、通例法。功效:稀释剂斗劲组和试验组的菌接纳率均年夜于80%:阴性斗劲组未检出阴性斗劲菌,试验组检出阳性试验菌。结论:可以用该微生物限度搜检法进行复方羊角片的搜检。

    【关头词】  复方羊角片;低速离心沉淀集菌法;造就基稀释法

    Verification Test on the Technology of Microbial Limit Test for Compound Yangjiao Tablets

      Li Yeifeng,et al

      Heilongjiang Renhetang Pharmaceutical Co.,Ltd(157011)

      Abstract:Objective:To establish microbial limit test method for Compound Yangjiao Tablets.Methods:Verification test was carries out by integrated twomethods,collecting bacteria with low-speed centrifugation and nutrient medium dilution method:nutrient medium dilution method:common method.Results:The recovery rates of thinner control group and trial group are all more than 80%:The negative control group does not pick out negative bacteria control,trial group checks up positive bacteria.Conclusion:The microbial limit test method can be used dy  Compound Yangjiao Tablets.   

      Key words:Compound Yangjiao Tablets;the method of collecting bacteria with low-speed centrifugation;Nutrent medium dilution method

      复方羊角片系由羊角、川芎、白芷、制川乌等药材制成的复方制剂,为偏头痛,血管性头痛,弥留性头痛,神经性头痛的常用药。主要身分川芎、白芷都有抑菌浸染,按通例体例测定其微生物限度无法确保功效的切确性,体例验证是保证功效切确的独一路子。

       

      工具

      1.1  仪器   

      电热恒温干燥箱、电热恒温造就箱、高压蒸汽灭菌锅、低速自动平衡离心计心情、净化事情台等。

      1.2  样品      

      复方羊角片(黑龙江仁合堂药业有限责任公司,批号:20090301)。

      1.3  造就基   

      营养琼脂造就基、玫瑰红钠琼脂造就基、胆盐乳糖造就基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)造就基、改良马丁造就基、曙红亚甲蓝琼脂(EMB)造就基,均购自中国药品生物制品检定所。造就基的制备按干燥造就基瓶签标示体例配制及灭菌。

      1.4  稀释剂   

      pH7.0无菌氯化钠-卵白胨缓冲液、0.9%氯化钠溶液。按中国药典2005年版一部附录体例配制及灭菌。

      1.5  菌种   

      金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、年夜肠埃希菌,白色念珠菌、黑曲霉菌均泉源于中国药品生物制品检定所。   

      体例

      2.1  菌液制备  分袂接种年夜肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的奇异造就物至营养肉汤造就基中,于32℃造就24h;接种白色念珠菌的的奇异造就物至改良马丁造就基中,于25℃造就48h,分袂取各菌种造就液1ml0.9%无菌氯化钠溶液稀释,分袂取1ml 10-5、10-610-7稀释液至平皿中,倾泻营养琼脂造就基,造就48h,计数;接种黑曲霉菌的奇异斜面造就物,用0.9%无菌氯化钠溶液5ml将孢子洗脱,罗致此溶液1ml0.9%无菌氯化钠溶液稀释,分袂取1ml 10-5、10-610-7稀释液至平皿中,倾泻玫瑰红钠琼脂造就基,造就48h,计数。拔取菌落数为50100cfu的响应稀释级的造就液,保留备用。

      2.2  供试液制备  称取样品10 g,研细,加pH7.0无菌氯化钠-卵白胨缓冲液至100 ml,制成 1∶10供试液。

      2.3  细菌总数、霉菌及酵母菌总数搜检体例的验证

      2.3.1  试验组  ①细菌:取划定量供试液,离心(500r/min5min,取全数上清液加pH7.0无菌氯化钠-卵白胨缓冲液补至原量,再离心(3000r/min20min,取舍上清液,留底部菌液约2ml,加pH7.0无菌氯化钠-卵白胨缓冲液补至原量混匀,根据2005版药典微生物限度造就基稀释法(0.2ml/皿)磨练;霉菌及酵母菌:取划定量供试液,根据2005版药典微生物限度造就基稀释法(0.2ml/皿)磨练。

      2.3.2  菌液组  测定所加的试验菌数。除不加供试液外,操纵同试验组。

      2.3.3  供试品斗劲组测定供试品本底菌数。除不加菌液外,操纵同试验组。

      2.3.4  稀释液斗劲组测定稀释液是否干扰微生物发展。取稀释液 l ml,别的同试验组。   

      三次试验功效见表1、表2、表3。   

      第一次试验功效:   

    细菌、霉菌及酵母菌数验证试验(略)

      第二次试验功效:   

      表细菌、霉菌及酵母菌数验证试验(略)

      第三次试验功效:   

      表细菌、霉菌及酵母菌数验证试验(略)

      2.4  节制菌搜检体例的验证

      2.4.1  试验组  1∶10供试液10ml,加胆盐乳糖造就基100ml,再加阳性斗劲菌年夜肠埃希菌菌液(浓度同细菌、霉菌及酵母菌数验证)1ml,摇匀,置3537℃造就24h后作 MUG试验及靛基质试验。操纵MUG造就和靛基质试验对年夜肠埃希菌进行造就检测。年夜肠埃希菌浓度同细菌、霉菌及酵母菌数验证。

      2.4.2  阴性菌斗劲组  体例同试验组,金黄色葡萄球菌菌液(浓度同细菌、霉菌及酵母菌数验证)l ml庖代年夜肠埃希菌。同时作稀释液和造就基阴性斗劲。   

      三次功效均齐截,见表4。   

      表节制菌验证试验功效(略)

      注:如MUG阳性、靛基质阳性,果断试验品检出年夜肠埃希菌;如MUG阴性、靛基质阴性,果断试验品未检出年夜肠埃希菌。   

      功效

      3.1  细菌总数、霉菌及酵母菌总数搜检体例验证5种菌株的接纳率均高于80%(表1、表2、表3),合适验证划定。稀释剂斗劲组的接纳率(%=(稀释剂斗劲组平均菌落数/菌液组平均菌落数)×100%;试验组的接纳率(%=[(试验组平均菌落数-供试品斗劲组平均菌落数)/菌液组平均菌落数]×100%。

      3.2  节制菌搜检体例验证试验组阳性菌斗劲检出年夜肠埃希菌,阴性菌斗劲未检出年夜肠埃希菌(表4),说明本法可检出年夜肠埃希菌,具有专属性,合适验证划定。   

      谈判

      4.1  在建树测定体例时应详尽某些供试品具有抑菌活性,概略影响磨练功效的切确性,必需对供试品的抑菌活性及测定体例的靠得住性进行验证。

    4.2  EMB平板上发展的菌落与年夜肠埃希菌形态疑似,应挑取可疑菌落进行涣散、纯化、染色镜检和IMViC试验,确认年夜肠埃希菌。 

    来源:《黑龙江医药》 

    【参考文献】

        [1] 中华人平易近共和国国家药典委员会.中国药典[S.一部.北京:化学财产出版社,2005.附录73.

      [2] 黄小静.4种丸剂微生物限度搜检法体例验证[J.海峡药学,2008,206):75-77.

    3] 宋勤,袁林娜,刘应旭.口服头孢拉定制剂微生物搜检法研究试验[J.药物剖析杂志,2005,256):689-691.

     

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